4.15 리스테리아 모노사이토제네스

가. 증균배양

가공식품 및 수산물에 대해서는 증균배지로 Listeria 증균배지(배지 35TM1333TM1223)를 사용하며, 검체 25 g(mL)를 취하여 225 mL의 Listeria 증균배지를 가한 후 30±1℃에서 48시간 배양한다. 유가 공품류(유함유가공품 제외), 식육가공품, 알가공품류(알함유가공품 제외), 식육 및 가금류는 25g(mL)을 Listeria 증균배지(배지 35TM1333TM1223), PALCAM 배지(배지 99TM1227), UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36TM1225TM2444) 또는 Half Fraser 배지(배지 98TM2447) 225 mL에 접종하여 30±1℃에서 24±2시간 동안 증균 배양한 후, 배양액 0.1 mL을 10 mL의 Fraser 배지(배지 37TM2092TM113)에 접종하여 35∼37℃ 에서 24∼48시간 2차 증균을 실시한다. 모든 시험에서는 검체를 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균배양액을 Oxford 한천배지(배지 38TM1229) 또는 LPM 한천배지(배지 39TM1213) 또는 PALCAM 한천배지(배지 62TM1226) 또는 ALOA 한천배지(배지 94TM1443TM004)에 접종하여 35〜37℃에서 24～48시간 배양한다. 의심집락이 확인되면 이를 0.6% yeast extract가 포함된 Tryptic soy 한천배지(배지 40TMH103)에 접종하여 30±1℃에서 24～48시간 배양한다.

다. 확인시험

그람염색 후 그람양성 간균이 확인되면 hemolysis, motility, catalase, mannitol, rhamnose, xylose의 당분해시험, Phosphatidylinositol phospholipase C(PI-PLC) 반응시험을 실시한다. 이 결과 β-hemolysis를 나타내고 catalase 양성, motility 양성을 나타내며, 당분해시험 결과 mannitol 비분해, rhamnose 분해, xylose 비분해, PI-PLC 반응시험 시 집락 주위에 불투명한 환이 보일 경우 Listeria monocytogenes 양성으로 판정한다 (단, 분리배양 시 ALOA 한천 배지를 사용한 경우, PI-PLC 반응시험을 생략할 수 있다). Hemolysis에 대한 부가 시험으로 CAMP test를 할 수 있으며, 그 결과 Staphylococcus aureus(ATCC 25923)에서 양성, Rhodococcus equi(ATCC 6939)에서 음성으로 나타나는 경우 Listeria monocytogenes 양성으로 판정한다.