ES 05703.1 총대장균군 · 시험관법

(Total Coliform-Multiple Tube Fermentation Method)

1.0

개요

1.1

목적

이 시험기준은 먹는물, 샘물·먹는샘물, 염지하수·먹는염지하수, 먹는해양심층수, 먹는물공동시설 등에 존재하는 총대장균군을 분석할 때 검사결과의 정확성과 통일성을 제 공하는 데 필요한 제반사항을 규정함을 목적으로 한다.

1.2

적용범위

이 시험기준은 「먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙」 제2조의 규정에 따른 먹는물, 샘물·먹는샘물, 염지하수·먹는염지하수, 먹는해양심층수, 먹는물공동시설 등의 수 질검사에 적용한다.

1.3

“내용 없음”

2.0

용어정의

2.1

총대장균군

그람음성·무아포성 간균으로서 락토오스를 분해하여 기체 또는 산을 생성하는 모든 호 기성 또는 통성 혐기성균 혹은 베타-갈락토오스 분해효소(β-galactosidase)의 활성이 있는 세균을 말한다.

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3.0

분석기기 및 기구

3.1

피펫 또는 자동피펫

부피 1 mL ～ 25 mL인 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2

마개 달린 유리시험관

소시험관(안지름 16 mm, 높이 150 mm), 중시험관(안지름 18 mm, 높이 180 mm), 대시 험관(안지름 32 mm, 높이 200 mm) 세 종류 시험관으로 플라스틱이나 금속 등과 같은 재질의 마개를 적용할 수 있고, 고압증기멸균을 할 수 있어야 한다.

3.3

다람(Durham)시험관

소시험관과 중시험관용 다람시험관(안지름 6 mm, 높이 30 mm)과 대시험관용 다람시험관(안지름 9 mm, 높이 45 mm)을 사용한다.

3.4

접종루프(Inoculation loop)

루프의 안지름이 약 3 mm인 접종루프를 사용한다.

3.5

배양기

배양온도를 (35.0 ± 0.5) ℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0

시약 및 표준용액

4.1

시약

4.1.1

시험관법 추정시험용 배지

조 성 소고기 추출물(beef extract)

6.0 g 펩톤(peptone)

10.0 g 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30)

10.0 g 표 1. 시험관법 추정시험용 배지(2배 농후 락토오스 배지TM757, 2 × Lactose brothTM757) 조성 성 분

조 성 황산라우린산나트륨(sodium lauryl sulfate, C12H25NaO4S, 분자량 : 288.00)

0.2 g 트립토오스(tryptose)

40.0 g 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30)

10.0 g 인산일수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 분자량 : 174.18)

5.5 g 인산이수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 분자량 : 136.09)

5.5 g 염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 분자량 : 58.50)

10.0 g 표 2. 시험관법 추정시험용 배지(2배 농후 라우릴 트립토오스 배지TM150, 2 × Lauryl tryptose brothTM150) 조성

성 분

조 성 소고기 추출물(beef extract)

9.0 g 펩톤(peptone)

15.0 g 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30)

15.0 g 표 3. 시험관법 추정시험용 배지(3배 농후 락토오스 배지TM757, 3 × Lactose brothTM757) 조성 ES 05703.1e

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성 분

조 성 황산라우린산나트륨(sodium lauryl sulfate, C12H25NaO4S, 분자량 : 288.00)

0.3 g 트립토오스(tryptose)

60.0 g 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30)

15.0 g 인산일수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 분자량 : 174.18)

8.25 g 인산이수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 분자량 : 136.09)

8.25 g 염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 분자량 : 58.50)

15.0 g 표 4. 시험관법 추정시험용 배지(3배 농후 라우릴 트립토오스 배지TM150, 3 × Lauryl tryptose brothTM150) 조성

4.1.2

시험관법 확정시험용 배지

상용화된 완성제품을 사용할 수 있으며, 제조하여 사용할 때는 정제수 1 L에 표 5의 성 분을 넣고 가열하여 녹인 후 pH가 (7.2 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 다람시험관이 들어 있는 시험관에 10 mL씩 나누어 넣고 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

성 분

조 성 소담즙(oxgall)

20.0 g 펩톤(peptone)

10.0 g 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30)

10.0 g 브릴리언트 그린(brilliant green, C27H34N2O4S, 분자량 : 484.00)

0.0133 g 표 5. 시험관법 확정시험용 배지(BGLBTM365, Brilliant green lactose bile 2 %) 조성 4.2

“내용 없음”

5.0

시료채취 및 관리

5.1

멸균된 시료용기를 사용하여 무균적으로 시료를 채취하고 즉시 시험해야 한다. 즉시 시험할 수 없으면 빛이 차단된 1 ℃ ～ 5 ℃ 냉장 보관 상태에서 30시간 이내에 시험해야 한다.

5.2

잔류염소가 존재하는 경우, 잔류염소 제거를 위한 시약은 잔류염소 4 mg/L 이하인 2024

5.3

수도꼭지에서 시료를 채취할 때는 수도꼭지를 틀어 수돗물을 2분 ～ 3분간 흘려버 린 후 채취한다. 수도꼭지에 연결된 부착물은 제거하고 깨끗한 헝겊이나 휴지로 이물질 을 닦아낸 후 시료를 채취한다. 필요하면 가스버너 등으로 수도꼭지 입구를 충분히 소독 한다.

5.4

먹는샘물, 먹는해양심층수, 먹는염지하수 제품수는 병의 마개를 열지 않은 상태의 제품을 말하며, 병의 마개가 열린 것은 시료로 사용할 수 없다.

6.0

정도보증/정도관리(QA/QC)

6.1

이 시험기준을 처음 실시하거나 사용하던 배지, 시약 등의 제조사가 바뀔 때마다 양성대조군과 음성대조군 시험을 동시에 실시해야 한다. 양성대조군 시험결과는 양성, 음성대조군 시험결과가 음성으로 나왔을 때만 유효한 결과값으로 판정한다.

6.2

양성대조군은 Escherichia coli 표준균주를 사용하고, 음성대조군은 멸균 희석액을 사용한다.

7.0

분석절차

7.1

“내용 없음”

7.2

시험방법

7.2.1

추정시험

7.2.1.1

수돗물과 먹는물공동시설에 대한 추정시험은 2배 농후의 락토오스배지TM757 또는 라우릴 트립토오스 배지TM150가 10 mL씩 들어 있는 중시험관(다람시험관이 들어 있는 시험관) 10 개에 시료 10 mL씩을 접종하여 (35.0 ± 0.5) ℃에서 (24 ± 2)시간 배양한다. (3배 농후 배지 10 mL가 들어 있는 시험관 5개에 시료 20 mL를 접종할 수도 있다.)

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샘물, 먹는샘물, 먹는해양심층수, 염지하수, 먹는염지하수에 대한 시험은 3배 농후의 락토오스 배지TM757 또는 라우릴 트립토오스 배지TM150가 25 mL씩 들어 있는 시험관(다람시험관이 들어 있는 시험관) 5개에 시료 50 mL씩을 접종하여 (35.0 ± 0.5) ℃에서 (24 ± 2)시간 배양한다.

7.2.1.2

배양 (24 ± 2)시간 경과 후 각 시험관을 잘 흔들어 확인하고, 어느 시험관에서도 기체가 발생하지 않으면 동일한 조건으로 (48 ± 3)시간까지 연장 배양한다. 기체가 발생하지 않으면 추정시험 음성으로 판정하고, 하나 이상의 시험관에서 기체가 발생하면 확인 즉시 확정시험을 실시한다.

7.2.2

확정시험

7.2.2.1

추정시험에서 기체가 발생했을 때는 기체가 발생한 모든 시험관에서 배양액을 1 접종루프씩 취하여 확정시험용 배지가 10 mL씩 들어 있는 시험관(다람시험관이 들어 있는 시험관)에 각각 접종해서 (35.0 ± 0.5) ℃에서 (48 ± 3)시간 배양한다.

7.2.2.2

이때 기체가 발생하지 않으면 총대장균군 확정시험을 음성으로 판정하고 기체가 발생하면 총대장균군 양성으로 판정한다.

7.2.3

모든 시험은 음성대조군 시험을 동시에 실시하며 음성대조군 시험결과는 음성으로 나왔을 때만 유효한 결과값으로 판정한다.

8.0

결과보고

8.1

결과 표기

수돗물과 먹는물공동시설을 시험한 결과 총대장균군이 검출되지 않으면 ‘불검출/100 mL’로, 검출되면 ‘검출/100 mL’로 표기하고 샘물, 먹는샘물, 먹는해양심층수, 염지하수와 먹는염지하수에 대한 시험결과는 총대장균군이 검출되지 않으면 ‘불검출/250 mL’로, 검출되면 ‘검출/250 mL’로 표기한다.

9.0

참고자료

US EPA Method 9131, Total coliform: Multiple tube fermentation technique (1986).

9.2

Standard Method 9221, 21st edition, Multiple-tube fermentation technique for members of the coliform group(2005).

9.3

일본 상수시험방법 8.2.1.2, 총대장균군-유당부이온 브릴리언트 그린 유당담즙 부 이온 배지법(2001).

10.0

“내용 없음”