4.12 황색포도상구균

4.12.1 정성시험

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 10% NaCl을 첨가한 TSB 배지(배지 23TMH102)에 가한 후 35∼37℃에서 18∼24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 10% NaCl을 첨가한 동일 TSB배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지 14TMH114) 또는 Baird-Parker 한천배지(배지 60TM358) 또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지(배지 64TM1579)에 접종하여 35∼37℃에서 18∼24시간 배양 한다. 배양결과 난황첨가만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환이 있는 집락 또는 Baird-Parker 한천배지에서 투명한 띠로 둘러싸인 광택이 있는 검정색 집락 또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지에서 불투명한 환으로 둘러싸인 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8TM341) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40TMH103)에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한 후 그람염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람 양성 구균을 확인한 후 coagulase 시험을 실시하며 24시간 이내에 응고유무를 판정한다. Baird-Parker(RPF) 한천배지에서 전형적인 집락으로 확인된 것은 coagulase 시험을 생략할 수 있다. Coagulase 양성으로 확인된 것은 생화학 시험을 실시하여 판정한다.

4.12.2 정량시험

가. 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 각 단계별 희석액을 Baird-Parker 한천배지 (배지 60TM358) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35～37℃ 에서 48±3시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지(배지 8TM341) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40TMH103)에 접종하고 35~37℃에서 18～24시간 배양한 후 4.12.1 정성시험 다. 확인시험에 따라 시험을 실시한다.

다. 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다. 예를 들어 10-1 희석용액을 0.3 mL, 0.3 mL, 0.4 mL씩 3장의 선택배지에 도말 배양하고, 3장의 집락을 합한 결과 100개의 전형적인 집락이 계수되었고 5개의 집락을 확인한 결과 3개의 집락이 황색포도상 구균으로 확인되었을 경우 시험용액 1 mL에는 황색포도상 구균의 수는 10 × 100 × (3/5) = 600으로 계산한다.