18-Ⅰ 생균수시험

1. 서론

이 시험은 호기조건에서 증식할 수 있는 중온성(中溫 性)의 세균 및 진균을 정량적으로 측정하는 방법이다. 이 시험은 원료 또는 제제가 규정된 미생물학적 품질규격에 적합한지 여부를 판정하는 것을 주목적으로 한다. 채취검 체수를 포함하여 지시된 시험방법에 따라 시험하여 결과 를 판정한다. 생균을 유효성분으로 함유하는 제품에는 이 시험을 적용하지 않는다. 이 장에서 규정한 시험법과 동 등성이 인정되는 경우에 자동화법을 포함한 다른 미생물 학적방법을 적용할 수 있다.

2. 기본조작

생균수측정은 검체가 외부로부터의 미생물 오염을 방지 할 수 있도록 설계된 조건에서 시험한다. 오염을 방지하 기 위한 예방조치는 시험에서 검출하고자 하는 어떤 미 생물에 대해서도 영향을 주어서는 안 된다. 검체가 항균 활성을 가지고 있을 때는 항균활성을 가능한 한 제거하 거나 중화한다. 이를 위해 불활성화제를 쓸 때는 유효성 이 있고 미생물에 대한 독성이 없음이 입증되어야 한다. 검체의 조제에 계면활성제를 쓸 때는 미생물에 대한 독 성이 없으며 또한 사용하는 불활성화제와 상호작용이 없 음을 확인한다.

3. 생균수측정법

보통 멤브레인필터법 또는 한천평판법을 쓴다. 최확수법 (most probable number, MPN)은 일반적으로 정확도 가 낮은 균수 측정법이기는 하나 오염균수가 아주 적은 검 체에 대해서는 최적의 방법이 될 수도 있다. 측정법의 선 택은 검체의 특성과 규정된 미생물한도값 등에 근거하며, 선택한 측정법은 규격에 적합한지 여부를 판단하기에 충 분한 양의 검체를 시험할 수 있어야 하고 적합성이 확인 되어야 한다.

4. 배지성능, 측정법의 적합성 및 음성대조

4.1. 일반요건

제품 존재 하에 시험법의 미생물 검출 능력을 확인한다. 그리고 시험법의 결과에 영향을 줄 수 있는 시험법이나 제품의 변경이 있을 때는 적합성을 확인한다.

4.2. 시험균의 조제

시험균은 표준화된 안정한 현탁액을 사용하거나 다음 과 같은 방법으로 조제한다. 시험에 쓰는 미생물은 최 초의 마스터시드로트(master seed-lot)로부터 계대 수 5 회를 넘지 않도록 시드로트 배양관리방법 (seed-lot system)으로 관리한다. 세균 및 진균의 각 시험균에 대하여 표 I-1에 기재한 조건으로 각각 따로 배양한다.

시험균 현탁액의 조제는 pH 7.0 펩톤염화나트륨완충 액TMH101TMTH001 또는 pH 7.2 인산완충액TMT007TMTH006을 쓴다. Aspergillus brasiliensis의 포자를 현탁할 때는 완충액에 폴리소르 베이트 80을 0.05 % 넣어도 된다. 현탁액은 2 시간 이 내에 쓰며 2 ~ 8 ℃로 보존하는 경우에는 24 시간 이 내에 쓴다. A. brasiliensis 또는 Bacillus subtilis의 영양형세포의 신선한 현탁액을 조제하여 희석하는 것 을 대신 포자현탁액 또는 아포현탁액을 조제하여 접종 균액으로 쓸 수 있다. 각 현탁액은 보증된 기간 내에서 는 2 ~ 8 ℃로 보존할 수 있다.

4.3. 음성대조

시험조건을 확인하기 위해 검액 대신 사용한 희석액 을 써서 음성대조시험을 한다. 미생물이 증식해서는 안 된다. 음성대조는 5.에 따른 검체시험할 때도 측정한다. 시험에 실패한 음성대조는 고찰한다.

4.4. 배지성능

시판배지는 배치마다 시험한다. 건조분말배지 또는 기 술한 각 성분을 써서 조제한 배지는 조제한 배치마다 시험한다. 표 I-1에 기재한 미생물의 소량(100 CFU 이하)을 대두카제인소화액체배지TMH102TMKH003, 대두카제인소화한천 배지TMH103 및 사부로포도당한천배지TMH104의 평판에 접종한다. 균 주마다 별개로 액체배지 또는 한천평판배지를 써서 표 I-1에 기재한 조건으로 각각 배양한다. 한천배지에서 는 접종균의 출현집락수가 표준화된 균액의 측정값의 1/2 ~ 2 배 이내 이어야 한다. 새로 조제한 배양균을 써서 시험하는 경우에는 이전 시험을 통해 확인된 배치 의 배지에서 얻은 증식과 동등한 증식을 확인한다. 액 체배지에서도 또한, 이전 시험을 통해 확인된 배치의 배지에서 얻은 증식과 동등한 증식을 확인한다.

4.5. 제품 존재 하의 측정법의 적합성

4.5.1. 검액의 조제 검액의 조제법은 검체의 물리적 특 성에 의존한다. 아래에 기재한 어느 방법도 만족할 수 없을 때에는 따로 적절한 다른 방법을 확립한다.

표 I-1 시험균의 조제와 사용법 배지성능 제품존재 하에서의생균수 측정법의 적합성 미생물 시험균의 조제 총호기성 미생물수 총진균수 총호기성 미생물수 총진균수 Staphylococcus aureus 예를 들면, ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP4.83, NBRC 13276 또는 KCTC 3881 대두카제인소화한 천배지TMH103 또는 대두카제인소화액 체배지TMH102TMKH003

30 ～ 35 ℃

18 ～ 24 시간 대두카제인소화한천 배지TMH103 그리고 대두카제인소화액체 배지TMH102TMKH003 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 3 일간 Pseudomonas aeruginosa 예를 들면, ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC 13275 또는 KCTC 2513 대두카제인소화한 천배지TMH103 또는 대두카제인소화액 체배지TMH102TMKH003

30 ～ 35 ℃

18 ～ 24 시간 대두카제인소화한천 배지TMH103 그리고 대두카제인소화액체 배지TMH102TMKH003 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 3 일간 Bacillus subtilis 예를 들면, ATCC 6633, NCIMB 8054, CIP 52.62, NBRC 3134 또는 KCTC 1021 대두카제인소화한 천배지TMH103 또는 대두카제인소화액 체배지TMH102TMKH003

30 ～ 35 ℃

18 ～ 24 시간 대두카제인소화한천 배지TMH103 또는 대두카제인소화액체 배지TMH102TMKH003 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 3 일간 Candida albicans 예를 들면, ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72, NBRC 1594 또는 KCTC 7965 사부로포도당한천 배지TMH104 또는 사부로포도당액체 배지TMH106

20 ～ 25 ℃

2 ～ 3 일간 대두카제인소화한천 배지TMH103 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 5일간 Aspergillus brasiliensis 예를 들면, ATCC 16404, IMI 149007, IP 1431.83, NBRC 9455, KCTC

6317 또는 KCTC 6196 사부로포도당한천 배지TMH104 또는 감자덱스트로오스 한천배지

20 ～ 25 ℃

5 ～ 7 일간 또는 양호한 포자형성이 인정될 때 까지 대두카제인소화한천 배지TMH103 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 5 일간

4.5.1.1. 수용성제제 검체를 pH 7.0 펩톤염화나트륨 완충액TMH101TMTH001, pH 7.2 인산완충액TMT007TMTH006 또는 대두카제인소화액체 배지TMH102TMKH003에 녹이거나 희석한다(보통 10 배 희석액을 조제 한다). 필요하면 pH 6 ~ 8로 조정한다. 희석이 더 필 요할 때는 같은 희석액으로 조제한다.

4.5.1.2. 물에 녹지 않는 비지질제제 검체를 pH 7.0 펩톤염화나트륨완충액TMH101TMTH001, pH 7.2 인산완충액TMT007TMTH006 또는 대두 카제인소화액체배지TMH102TMKH003에 현탁한다(보통 10 배 희석액을 조제한다). 분산하기 쉽도록 폴리소르베이트 80(농도 : 1 g/L)과 같은 계면활성제를 넣을 수 있다. 필요하면 pH 6 ~ 8로 조정한다. 희석이 더 필요할 때는 같은 희석액으로 조제한다. 대두카제인소화한천 배지TMH103 / MPN대두카제인소화 액체배지TMH102TMKH003 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 3 일간 대두카제인소화한천 배지TMH103 / MPN대두카제인소화 액체배지TMH102TMKH003 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 3 일간 대두카제인소화한천 배지TMH103 / MPN대두카제인소화 액체배지TMH102TMKH003 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 3 일간 사부로포도당 한천배지TMH104 ≦ 100 CFU

20 ～ 25 ℃ ≦ 5일간 대두카제인소화한천 배지TMH103 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 5일간 MPN : 적용하지 않는다. 사부로포도당 한천배지TMH104 ≦ 100 CFU

20 ～ 25 ℃ ≦ 5일간 사부로포도당 한천배지TMH104 ≦ 100 CFU

20 ～ 25 ℃ ≦ 5일간 대두카제인소화한천 배지TMH103 ≦ 100 CFU

30 ～ 35 ℃ ≦ 5 일간 MPN : 적용하지 않는다. 사부로포도당 한천배지TMH104 ≦ 100 CFU

20 ～ 25 ℃ ≦ 5 일간

4.5.1.3. 지질제제 검체를 여과 멸균한 미리스틴산이 소프로필에 녹이거나 필요하면 40 ℃ 이하(예외적인 경우에는 45 ℃ 이하)에서 가온한 최소필요량의 멸균 된 폴리소르베이트 80 또는 다른 저해성이 없는 계면 활성제를 써서 혼합한다. 필요하면 수욕에서 그 온도를 유지하면서 주의하여 섞는다. 선정한 희석액을 미리 가 온하여 넣어 검체의 10 배 희석액을 조제한다. 유액의 형성에 필요한 가장 짧은 시간 동안 온도를 유지하면서 주의하여 섞는다. 적절한 농도의 멸균한 폴리소르베이 트 80 또는 다른 저해성이 없는 계면활성제를 함유하 는 같은 희석액으로 10 배 단계 희석계열을 조제해도 된다.

4.5.1.4. 에어로솔형의 액체 또는 고체 검체를 무균적 으로 멤브레인필터장치에 넣거나 멸균용기에 옮긴 다 음 검체를 채취한다. 각 검체 용기에서 전체량 또는 규 정된 횟수로 분무한 일정 용량을 쓴다.

4.5.1.5. 경피흡수제 경피흡수제의 보호피복(박리라이

너)을 제거하고 점착면을 위로 향하게 하여 멸균유리 또는 멸균플라스틱트레이(tray) 위에 놓는다. 패치끼 리 서로 달라붙는 막기 위해 멸균한 다공성물질(예를 들면 멸균거즈)로 점착면을 덮는다. 폴리소르베이트

80 및/또는 레시틴 등의 불활성화제를 함유하는 희석 액을 선정하고 적당량의 희석액에 패치를 넣어 30 분 이상 세게 흔들어 섞는다.

4.5.2. 접종 및 희석 100 CFU 이하의 접종균을 얻는 데 충분한 양의 시험균 현탁액을 4.5.1.에 따라 조제한 검액 및 대조액(검체 불포함)에 넣는다. 접종하는 시험 균 현탁액의 양은 검액량의 1 %를 초과하지 않도록 한 다. 제품에서 허용가능한 미생물 회수결과를 얻기 위해 가장 낮은 희석배율의 검액을 가지고 시험한다. 항균활 성 또는 낮은 용해도 때문에 가장 낮은 희석배율의 검 액으로 시험할 수 없는 경우에는 다시 적절한 시험방법 을 확립한다. 검체로 인한 증식저지를 피할 수 없는 경 우에는 중화, 희석 또는 여과한 다음에 시험균 현탁액 을 넣어도 된다.

4.5.3. 항균활성의 중화·제거 4.5.2. 및 4.5.4.에 기재 한 방법에 따라 시험하여 검액에서 회수한 균수와 대조 액에서 회수한 균수를 비교한다. 증식이 저해되는 경우 (검액에서 회수한 균수가 대조액에서 회수한 균수의 1/2 미만인 경우)에는 결과의 유효성을 확보하기 위해 생균수측정법을 변경한다. 방법의 변경은 예를 들어 (1) 희석액 또는 배지의 증량, (2) 특이적 또는 일반적인 중 화제를 희석액에 첨가, (3) 막여과 또는 (4) 위의 측정 법의 조합 등이다.

중화제 항균제의 활성을 중화하기 위해 중화제를 쓸 수 있다(표 I-2). 중화제는 선정한 희석액 또는 배지 에 첨가할 수 있으며, 가능한 멸균 전에 첨가한다. 중화 제를 쓴 경우에는 중화제의 그 유효성과 미생물에 대 한 독성이 없음을 증명하기 위해 검체를 함유하지 않 고 중화제만을 넣어 공시험하여 확인한다.

적절한 중화법을 확립할 수 없는 경우에는 그 검체가 가지는 항균활성 때문에 접종균을 분리할 수 없는 것으로 간주한다. 따라서 그 검체가 접종균과 같은 종의 균이 나 근연종에 오염되었을 가능성은 낮은 것으로 생각한 다. 그러나 그 검체가 이들 일부 미생물만을 저해할 뿐 이고, 시험균주 이외의 균주는 저해하지 않을 가능성도 있으므로 미생물의 증식과 그 허용기준에 적합한 가장 낮은 농도로 시험한다.

표 I-2 저해물질에 대한 일반적인 중화제/중화법 저해물질 중화제/중화법 글루타르알데히드, 수은제 아황산수소나트륨 페놀류, 알코올, 알데히드류, 소르빈산염 희석 알데히드류 글리신 4급 암모늄 화합물, 파라벤류, 비스비구아니드류 레시틴 4급 암모늄 화합물, 파라벤류, 요오드 폴리소르베이트 수은제 티오글리콜산염 수은제, 할로겐류, 알데히드류 티오황산염 에데트산염 (EDTA) 마그네슘 또는 칼슘 이온

4.5.4. 제품에서의 미생물 회수 표 I-1 에 기재된 미생 물마다 따로 시험한다. 첨가한 미생물만을 대상으로 측정한다.

4.5.4.1. 멤브레인필터법 공경 0.45 μm 이하의 멤브 레인필터를 쓴다. 필터의 재질은 검체의 성분에 의하여 세균포집능력이 영향을 받지 않도록 주의하여 선택한 다. 표 I-1의 각 미생물마다 1 개의 멤브레인필터를 쓴다. 4.5.1. ~ 4.5.3.에 따라 조제한 검체의 적당량 (가능하면 검체의 1 g 해당량 또는 다수의 집략형성이 예측되는 경우에는 그 이하)을 멤브레인필터에 넣어 즉시 여과하고 적당량의 희석액으로 멤프레인필터를 씻는다. 멤브레인필터를 총호기성미생물수(total aerobic microbial count ; TAMC) 측정용으로는 대 두카제인소화한천배지TMH103의 표면으로, 총진균수(total combined yeasts/mould count : TYMC) 측정용으로 는 사부로포도당한천배지TMH104의 표면으로 옮긴다. 표 I-1 에 기재한 조건으로 이들 평판을 배양한 다음 집락수를 측정한다.

4.5.4.2. 한천평판법 한천평판법은 각 배지에 대하여 적어도 2 개의 평판을 써서 시험하며, 결과는 각 평판 의 측정균수의 평균값을 사용한다.

4.5.4.2.1. 한천평판혼합법

지름 9 cm의 페트리접시를 쓸 때는 페트리접시에

4.5. 제품 존재 하의 측정법의 적합성 항목의 4.5.1. ~ 4.5.3.에 따라 조제한 검체 1 mL 및 미리 45 ℃ 이하 로 보온한 15 ~ 20 mL의 대두카제인소화한천배지TMH103 또 는 사브로포도당한천배지TMH104를 넣는다. 보다 큰 페트리접 시를 쓸 때는 크기에 맞게 한천배지량을 증가한다. 표 I-1에 제시한 미생물마다 적어도 2 개의 페트리접시 를 쓴다. 표 I-1에 기재한 조건으로 평판배지를 배양 한다. 배지마다 균수의 산술평균을 가지고 집락수를 계 산한다.

4.5.4.2.2. 한천평판도말법 지름 9 cm의 페트리접시 를 쓸 때는 15 ~ 20 mL의 대두카제인소화한천배지TMH103 또는 사부로포도당한천배지TMH104를 약 45 ℃일 때 넣어 굳 힌 다음 층류식 캐비넷이나 항온기 중에서 평판배지를 건조한다. 보다 큰 페트리접시를 쓸 때는 크기에 맞게 한천배지량을 증가한다. 표 I-1에 기재한 미생물마다 적어도 2 개의 페트리접시를 쓴다. 4.5. 제품 존재 하 의 측정법의 적합성 항목의 4.5.1. ~ 4.5.3.에 따라 조 제한 검체 0.1 mL 이상을 정확하게 취하여 배지표면 전체에 편다. 4.5.4.2.1.에 기재한 것과 같이 배양하여 측정한다.

4.5.4.3. 최확수법 최확수법의 정밀도 및 정확도는 멤 브레인필터법 또는 한천평판법 보다 낮다. 특히 곰팡이 를 측정할 때는 신뢰성이 낮다. 이러한 이유로 최확수 법은 다른 방법의 이용이 불가능할 때의 총호기성미생 물수의 측정에 이용한다. 이 법을 적용할 때는 다음과 같이 한다. 4.5. 제품 존재 하의 측정법의 적합성 항목 의 4.5.1. ~ 4.5.3.에 따라 검체의 적어도 3 연속의

10 배 단계 희석계열을 조제한다. 각 희석단계로부터 각각 1 g 또는 1 mL 씩을 취하고 대두카제인소화액체 배지TMH102TMKH003가 9 ~ 10 mL 들어있는 3 개의 시험관에 각각 접 종한다. 필요하면 폴리소르베이트 80과 같은 계면활성 제 또는 항균제의 불활성화제를 배지에 첨가할 수 있 다. 따라서 3 단계의 희석계열을 조제한 경우에는 9 개 의 시험관에 접종하는 것이 된다. 모든 시험관을 30 ~

35 ℃에서 3 일을 넘지 않는 기간 동안 배양한다. 검체 의 성질로 인해 결과의 판정이 곤란하거나 불확실한 경 우에는 같은 배지 또는 대두카제인소화한천배지TMH103에 이 식한 다음 같은 온도에서 1 ~ 2 일간 배양하고 이 결 과를 쓴다. 표 I-3 으로부터 검체 1 g 또는 1 mL 당 미생물의 최확수를 구한다.

표 I-3 미생물의 최확수 각 세트에서의 미생물 증식을 나타내는 시험관 수의 조합 제품 1 g

95 % 신뢰한계 시험관 당 제품의 g 또는

1 mL 당의 또는 mL 수 최확수 0.1 0.01 0.001 0 0 0 ＜ 3

0 ~ 9.4 0 0 1 3

0.1 ~ 9.5 0 1 0 3

0.1 ~ 10 0 1 1 6.1

1.2 ~ 17 0 2 0 6.2

1.2 ~ 17 0 3 0 9.4

3.5 ~ 35 1 0 0 3.6

0.2 ~ 17 1 0 1 7.2

1.2 ~ 17 1 0 2 11

4 ~ 35 1 1 0 7.4

1.3 ~ 20 1 1 1 11

4 ~ 35 1 2 0 11

4 ~ 35 1 2 1 15

5 ~ 38 1 3 0 16

5 ~ 38 2 0 0 9.2

1.5 ~ 35 2 0 1 14

4 ~ 35 2 0 2 20

5 ~ 38 2 1 0 15

4 ~ 38 2 1 1 20

5 ~ 38 2 1 2 27

9 ~ 94 2 2 0 21

5 ~ 40 2 2 1 28

9 ~ 94 2 2 2 35

9 ~ 94 2 3 0 29

9 ~ 94 2 3 1 36

9 ~ 94 3 0 0 23

5 ~ 94 3 0 1 38

9 ~ 104 3 0 2 64

16 ~ 181 3 1 0 43

9 ~ 181 3 1 1 75

17 ~ 199 3 1 2 120

30 ~ 360 3 1 3 160

30 ~ 380 3 2 0 93

18 ~ 360 3 2 1 150

30 ~ 380 3 2 2 210

30 ~ 400 3 2 3 290

90 ~ 990 3 3 0 240

40 ~ 990 3 3 1 460

90 ~ 1980 3 3 2 1100

200 ~ 4000 3 3 3 > 1100

4.6. 결과 및 판정 멤브레인필터법 또는 한천평판법의 적합 성을 확인할 때 모든 시험균의 평균측정값이 4.5.2.에 서 정의한 대조액(제품 불포함)의 측정값의 1/2 ~ 2 배 이내이어야 한다. 최확수법의 적합성을 확인할 때 측정값은 대조액에서 얻은 결과의 95 % 신뢰한계 범 위 이내이어야 한다. 기술한 어떠한 방법에서도 시험균 하나 또는 그 이상의 균종에서 위의 기준을 충족시키지 못하는 경우에는 기준에 가장 근접한 방법과 시험조건 으로 제품를 시험한다.

5. 제품의 시험

5.1. 시험량

따로 규정이 없는 한, 위에 기술한 대로 주의하여 채취 한 검체 10 g 또는 10 mL를 쓴다. 에어로솔형의 액체 또는 고체는 검체 10 개 용기를 취한다. 경피흡수제는 검체 10 개 패치를 취한다. 투여단위(예를 들면 정제, 캡슐제, 주사제) 당의 주성분량이 1 mg 이하이거나 또 는 1 g 또는 1 mL(투여단위가 표시되지 않은 제제) 당의 활성성분량이 1 mg 미만인 경우는 시험량을 줄일 수 있다. 이 경우 시험량은 제품의 10 투여단위 혹은

10 g 또는 10 mL에 들어있는 양보다도 적지 않도록 한다. 주성분으로 사용되는 물질은 검체의 양에 제한이 있거나 배치 크기가 매우 작은(예를 들면 1000 mL 또 는 1000 g 미만) 경우에는 보다 적은 양이 규정되어 있거나 정당한 이유가 없는 한 시험량은 배치의 1 %로 한다. 배치 크기가 200 미만(예를 들면 임상시험용 검

체)인 검체에서는 시험량은 2 투여단위로 또는 배치 크기가 100 미만의 경우에는 1 투여단위로 줄일 수 있 다. 원료 또는 제제의 용기로부터 무작위로 검체를 채 취한다. 필요한 양의 검체를 얻기 위해 충분한 수의 용 기의 내용물을 섞는다.

5.2. 제품 시험

5.2.1. 멤브레인필터법 필터를 배지에 넣을 수 있도록 설계된 여과장치를 쓴다. 4.5. 제품 존재 하의 측정법 의 적합성에 따라 적합성이 확인된 방법으로 검체를 조 제하고 적당량을 2 개의 멤브레인필터에 각각 넣고 즉 시 여과한다. 적합성이 확인된 방법에 따라 각 필터를 씻는다. 1 개의 멤브레인필터는 총호기성미생물수 측 정을 위해 대두카제인소화한천배지TMH103의 표면에, 다른 한 개의 멤브레인필터는 총진균수 측정을 위해 사부로포 도당한천배지TMH104의 표면에 놓는다. 대두카제인소화한천배 지TMH103를 30 ~ 35 ℃에서 3 ~ 5일간, 사부로포도당배지를

20 ~ 25 ℃에서 5 ~ 7일간 배양한다. 검체 1 g 또는

1 mL 당의 집락수를 계산한다. 경피흡수제를 시험할 때는 4.5.1.에 기재되어 있는 조제액의 10 % 씩을 2 개의 멸균멤브레인필터로 따로 여과한다. 1 개의 멤브 레인필터는 총호기성미생물수 측정을 위해 대두카제 인소화한천배지TMH103에 넣고 다른 한 개의 멤브레인필터는 총진균수 측정을 위해 사부로포도당한천배지TMH104에 넣는다.

5.2.2. 한천평판법

5.2.2.1. 한천평판혼합법 4.에 따라 적합성이 확인된 방법으로 검액을 조제한다. 각 배지에 대하여 희석단계 마다 적어도 2 개의 페트리접시를 준비한다. 대두카제 인소화한천배지TMH103는 30 ~ 35 ℃에서 3 ~ 5일간 배양하 고 사부로포도당한천배지TMH104는 20 ~ 25 ℃에서 5 ~ 7 일간 배양한다. 집락수가 총호기성미생물수 측정에서 는 250 미만, 총진균수 측정에서는 50 미만이면서 가 장 많은 집락수를 나타내는 희석도의 한천배지를 선택 하여 균수를 구한다. 배지마다 균수의 산술평균을 구하 여 검체 1 g 또는 1 mL 당의 집락수를 계산한다.

5.2.2.2. 한천평판도말법 4.에 따라 적합성이 확인된 방법으로 검액을 조제한다. 각 배지에 대하여 희석단계 마다 적어도 2 개의 페트리접시를 준비한다. 배지 및 집락수의 계산은 한천평판혼합법에 기재된 대로 한다.

5.2.3. 최확수법 4.에 따라 적합성이 확인된 방법으로 검액을 조제하여 희석한다. 모든 시험관을 30 ~ 35 ℃ 에서 3 ~ 5일간 배양한다. 필요하면 적합성이 확인된 방법으로 이식배양한다. 희석단계마다 미생물의 증식 이 인정되는 시험관수를 기록한다. 표 I-3으로부터 검 체 1 g 또는 1 mL 당 미생물의 최확수를 구한다.

5.3. 결과의 판정 대두카제인소화한천배지TMH103를 써서 측정 된 집락수를 총호기성미생물수(TAMC)로 한다. 이 배 지 위에 진균의 집락이 검출되어도 TAMC로 계산한다. 사부로포도당한천배지TMH104를 써서 측정하는 집락수를 총진 균수(TYMC)로 한다. 이 배지 위에 세균의 집락이 검 출되어도 TYMC로서 계산한다. 세균의 증식 때문에 TYMC가 허용기준을 넘을 것으로 예측될 때는 항생물 질을 함유하는 사부로포도당한천배지TMH104를 써도 된다. 최 확수법으로 측정하는 경우에는 계산값을 TAMC로 한 다. 미생물학적 품질 허용기준이 규정되어 있을 때 아 래와 같이 판정한다.

- 101 CFU : 최대허용 수 = 20

- 102 CFU : 최대허용 수 = 200

- 103 CFU : 최대허용 수 = 2000

⋮ 권장 용액 및 배지는 ｢특정미생물시험｣에 기재되어 있다.