나) 녹농균시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL를 달아 카제인대두소화액체배 지TMH102를 사용하여 10 mL로 하고 30∼35 ℃에서 24∼48시간 증균 배양한다. 증식이 나타나는 경우는 백금이 등으로 세트리미드한천배지TMH113 또는 엔에이 씨한천배지에 도말하여 30∼35 ℃에서 24∼48시간 배양한다. 미생물의 증식이 관찰되지 않는 경우 녹농균 음성으로 판정한다. 그람음성간균으로 녹 색 형광물질을 나타내는 집락을 확인하는 경우에는 증균배양액을 녹농균 한천배지 PTM267TM1812 및 F에 도말하여 30∼35 ℃에서 24∼72시간 배양한다. 그람음성간균으로 플루오레세인 검출용 녹농균 한천배지TM1279TM266 F의 집락을 자외선하에서 관찰하여 황색의 집락이 나타나고, 피오시아닌 검출용 녹농균 한천배지TM267TM1812 P의 집락을 자외선하에서 관찰하여 청색의 집락이 검출되면 옥시다제시험 을 실시한다. 옥시다제반응 양성인 경우 5∼10초 이내에 보라색이 나타나 고 10초 후에도 색의 변화가 없는 경우 녹농균 음성으로 판정한다. 옥시다제반응 양성인 경우에는 녹농균 양성으로 의심하고 동정시험으로 확인한다.

(2) 배지

카제인대두소화액체배지TMH102

카제인 판크레아틴 소화물

17.0 g

대두파파인소화물

3.0 g

염화나트륨

5.0 g

인산일수소칼륨

2.5 g

포도당일수화물

2.5 g

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.3 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

세트리미드한천배지TMH113(Cetrimide agar)

젤라틴제 펩톤

20.0 g

염화마그네슘

3.0 g

황산칼륨

10.0 g

세트리미드

0.3 g

글리세린

10.0 mL

한천

13.6 g

정제수

1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

엔에이씨한천배지(NAC agar)

펩톤

20.0 g

인산수소이칼륨

0.3 g

황산마그네슘

0.2 g

세트리미드

0.2 g

날리딕산

15 mg

한천

15.0 g

정제수

1000 mL

최종 pH는 7.4 ± 0.2이며 멸균하지 않고 가온하여 녹인다.

플루오레세인

검출용

녹농균

한천배지

F

(Pseudomonas

agar

F for detection of fluorescein)

카제인제 펩톤

10.0 g

육제 펩톤

10.0 g

인산일수소칼륨

1.5 g

황산마그네슘

1.5 g

글리세린

10.0 mL

한천

15.0 g

정제수

1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

피오시아닌

검출용

녹농균

한천배지

P

(Pseudomonas

agar

P for detection

of pyocyanin)

젤라틴의 판크레아틴 소화물

20.0 g

염화마그네슘

1.4 g

황산칼륨

10.0 g

글리세린

10.0 mL

한천

15.0 g

정제수

1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.