가) 대장균 시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL을

유당액체배지TM757를 사용하여 10 mL로 하여 30∼35 ℃에서 24∼72시간 배양한다. 배양액을 가볍게 흔든 다음 백금이 등으로 취하여 맥콘키한천배지TMH110위에 도말하고 30∼35 ℃에서 18∼24 시간 배양한다. 주위에 적색의 침강선띠를 갖는 적갈색의 그람음성 균의 집락이 검출되지 않으면 대장균 음성으로 판정한다. 위의 특정을 나타내는 집락이 검출되는 경우에는 에오신메칠렌블루한천배지TM371TM336에서 각각의 집락을 도말하고 30∼35 ℃에서 18∼24시간 배양한다. 에오신메칠렌블루한천배지TM371TM336에서 금속 광택을 나타내는 집락 또는 투과광선하에서 흑청색을 나타내는 집락이 검출되면 백금이등으로 취하여 발효시험관이 든 유당액체 배지TM757에 넣어 44.3∼44.7 ℃의 항온수조 중에서 22∼26 시간 배양한다. 가스 발생이 나타나는 경우에는 대장균 양성으로 의심하고 동정시험으로 확인한다.

(2) 배지

유당액체배지TM757

육엑스

3.0 g

젤라틴의 판크레아틴 소화물

5.0 g

유당

5.0 g

정제수

1000 mL

산화(oxidizing) 화합물

치오황산나트륨

이소치아졸리논,

이미다졸

레시틴, 사포닌,

아민, 황산염, 메르캅탄,

아황산수소나트륨,

치오글리콜산나트륨

비구아니드

레시틴, 사포닌,

폴리소르베이트 80

금속염(Cu, Zn, Hg),

유기－수은 화합물

아황산수소나트륨,

L－시스테인－SH 화합물(sulfhydryl compounds), 치오글리콜산

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 121 ℃에서 15∼20 분간 고압증기멸균한 다. 멸균 후의 pH가 6.9∼7.1이 되도록 하고 가능한 한 빨리 식힌다.

맥콘키한천배지TMH110

젤라틴의 판크레아틴 소화물

17.0 g

카제인의 판크레아틴 소화물

1.5 g

육제 펩톤

1.5 g

유당

10.0 g

데옥시콜레이트나트륨

1.5 g

염화나트륨

5.0 g

한천

13.5 g

뉴트럴렛

0.03 g

염화메칠로자닐린

1.0 mg

정제수

1000 mL

이상을 달아 정제수 1 L에 녹여 1분간 끓인 다음 121 ℃에서 15∼20 분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9∼7.3이 되도록 한다.

에오신메칠렌블루한천배지TM371TM336(EMB한천배지TM371TM336)

젤라틴의 판크레아틴 소화물

10.0 g

인산일수소칼륨

2.0 g

유당

10.0 g

한천

15.0 g

에오신

0.4 g

메칠렌블루

0.065 g

정제수

1000 mL

이상을 달아 정제수 1 L에 녹여 121 ℃에서 15∼20 분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9∼7.3이 되도록 한다.