식품공전 4.8 대장균 시험에는 BGLB배지, EMB 한천배지, 보통한천배지, EC 배지, MacConkey 한천배지, Tryptic Soy 한천배지, MMGM(Minerals modified glutamate medium), BCIG 한천배지, EC-MUG 배지, Lauryl Sulfate Tryptose (LST) Broth, 0.1% Peptone solution 배지가 쓰입니다. TM MEDIA 대응 제품은 TM417 EC BROTH, TM336 EMB AGAR, TM341 NUTRIENT AGAR, TMH103 SOYA CASEIN DIGEST AGAR (TRYPTONE SOYA AGAR) (CASO AGAR) (as per USP/EP/JP/BP), TM1857 MINERAL MODIFIED GLUTAMATE BROTH BASE (as per ISO 16649), TM1339 CHROMOGENIC E. COLI AGAR (CHROMOGENIC TRYPTONE BILE GLUCURONIDE AGAR) (TBX AGAR), TM1027 MUG EC BROTH, TM365 BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% (BRILLIANT GREEN LACTOSE BILE BROTH 2%), TM150 LAURYL SULPHATE BROTH (LAURYL TRYPTOSE BROTH), TMH110 MacCONKEY AGAR (as per USP/EP/BP/JP)입니다.
단계별 배지TM MEDIA 코드
- 정성시험
- 정량시험 · 최확수법
필요한 제품10종
시험 방법원문
4.8.1 정성시험
4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL를 3개의 EC 배지(배지 10TM417)에 접종하고 44±1℃에서 24±2시간 배양 후 가스발생을 인정한 발효관은 추정시험 양성으로 하고 가스발생이 인정되지 않을 때에는 추정시험 음성으로 한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 추정시험이 양성일 때에는 해당 EC 발효관으로부터 EMB 한천배지(배지 6TM336)에 접종하여 35～37℃에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 집락을 보통한천배지 (배지 8TM341) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40TMH103)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지에서 배양된 집락을 취하여 그람염색을 실시하여 그람 음성, 무아포성 간균을 확인한 후 IMViC시험(Indole test, Methyl red test, VP test, Citrate test)등 생화학 시험을실시하여 대장균 양성으로 판정한다.
4.8.2 정량시험
가. 최확수법
1) 제1법
4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 각각 5개 또는 3개의 EC 배지(배지 10TM417) 발효관에 접종한 다음 44.±1℃에서 24±2시간 배양한다. 단, 10 mL를 접종할 때에는 2배 농도 EC 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다.
시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 가스발생을 인정한 발효관에 대하여 4.8.1 정성시험 가. 한도시험에서 추정시험 양성일 때와 같이 행하여 대장 균의 유무를 확인한 다음 별표 1 또는 별표 2 최확수표로부터 검체 1 mL 또는 1 g 중의 대장균수를 산출한다.
2) 제2법 (패각)
(1) 시험용액의 제조
패각을 제거한 검체 200 g에 0.1% peptone solution(시액 9) 200mL을 첨가하여 분쇄한 후 분쇄액 20 mL과 동일한 희석액(시액 9) 80 mL을 혼합하여 최종 10배 희석한 것을 시험용액 으로 사용한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 시험용액은 필요에 따라 100배, 1,000배 등으로 희석하여 사용할 수 있다.
(2) 추정시험
제조법에 따른 시험용액 10 mL을 5개의 2배 농도 MMGM 배지(배지 66TM1857)가 들어있는 시험 관에 접종하고, 또 시험용액 1 mL 및 0.1 mL을 각각 5개의 MMGM 배지가 들어있는 시험 관에 접종하여 37±1℃에서 24±2시간 배양한다. 배양 결과 시험관내의 배지의 색깔이 노란 색으로 되었을 때 추정시험 양성으로 하며 확정시험을 실시한다.
(3) 확정시험
추정시험에서 양성으로 확인된 MMGM 시험관 배양액을 BCIG 한천배지(배지 67TM1339)에 분리 배양한다. 44±1℃에서 24±2시간 배양 후 청녹색의(blue-green) 전형적인 집락이 발생되면 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 최확수표에 따라 검체 100 g중의 대장균수를 산출한다.
3) 제3법 (유가공품·식육가공품·알가공품)
가) 최확수법
최확수법(3개 또는 5개 시험관을 이용한 MPN법)으로 대장균군수 검사에서 사용한 BGLB배지에서 가스생성 양성인 시험관으로부터 EC-MUG배지(배지 88TM1027), BGLB-MUG (배지 3TM365) 또는 LST-MUG(배지 89TM150TM1829)에 접종하여 44±1℃에서 24±2시간 배양한 후 자외선 조사하에 푸른 형광이 관찰되는 시험관을 대장균 양성으로 판정하고 최확수표 (별표 1 또는 별표 2)에 근거하여 대장균수를 산출한다.
나) 대장균 확인시험
최확수법에서 가스생성과 형광이 관찰된 것은 대장균 추정시험 양성으로 판정하고 대장 균의 확인시험은 추정시험 양성으로 판정된 시험관으로부터 EMB 한천배지(배지6TM336) 또는 MacConkey 한천배지(배지30TMH110TM1898)에 접종하여 37℃에서 24시간 배양하여 전형적인 집락을 관찰 하고 그람염색, MUG시험, IMViC시험 등을 검사하여 최종확인한다. 대장균은 MUG시험 에서 형광이 관찰되며, 가스생성, 그람음성의 무아포간균이며, IMViC시험에서 “ + + - - ”의 결과를 나타내는 것은 대장균(E. coli) biotype 1로 규정한다.
나. 건조필름법
4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 단계 희석액 1 mL를 2매 이상씩 건조필름배지에 접종한 후, 35±1℃에서 24∼48시간 배양한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 건조필름배지에서 집락수를 계산하여 그 평균집락수에 희석배수를 곱하여 대장균 수를 산출하거나 4.5.1 일반세균수에 따라 한다 (검체에 따라 결과에 의심이 있을 경우 최확수법을 사용하여야 한다). 세부적인 배양온도, 배양 시간, 집락의 색깔 등은 해당 제조사의 사용지침을 우선하여 따른다.
다. 자동화된 최확수법(Automated MPN)
치즈, 식육추출가공품, 닭도체, 오리도체에 한한다.
별표 1. 3단계희석 시험관 5개씩 시험하였을 때 양성에 대한 최확수(95%의 신뢰한계) 양성시험관수
0.1 0.01
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MPN/
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5 5 4
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33
46
63
84
110
130
49
70
94
120
150
180
79
110
140
180
210
250
130
170
220
280
350
430
240
350
540
920
1,600
>1,600 ※ 최확수법을 이용한 판정 시 양성 시험관수가 모두 0인 경우 결과값은 0으로 간주한다. 별표 2. 3단계희석 시험관 3개씩 시험하였을 때 양성에 대한 최확수(95%의 신뢰한계) 양성시험관수
MPN/g(mL)
양성시험관수
MPN/g(mL)
0.1
0.01
0.001
0.1
0.01
0.001
0
0
0
0
0
1
0
0
2
0
0
3
0
1
0
0
1
1
0
1
2
0
1
3
0
2
0
0
2
1
0
2
2
0
2
3
0
3
0
0
3
1
0
3
2
0
3
3
1
0
0
1
0
1
1
0
2
1
0
3
1
1
0
1
1
1
1
1
2
1
1
3
1
2
0
1
2
1
1
2
2
1
2
3
1
3
0
1
3
1
1
3
2
1
3
3
<3
3
6
9
3
6.1
9.2
12
6.2
9.3
12
16
9.4
13
16
19
3.6
7.2
11
15
7.4
11
15
19
11
15
20
24
16
20
24
29
2
0
0
2
0
1
2
0
2
2
0
3
2
1
0
2
1
1
2
1
2
2
1
3
2
2
0
2
2
1
2
2
2
2
2
3
2
3
0
2
3
1
2
3
2
2
3
3
3
0
0
3
0
1
3
0
2
3
0
3
3
1
0
3
1
1
3
1
2
3
1
3
3
2
0
3
2
1
3
2
2
3
2
3
3
3
0
3
3
1
3
3
2
3
3
3
9.2
14
20
26
15
20
27
34
21
28
35
42
29
36
44
53
23
38
64
95
43
75
120
160
93
150
210
290
240
460
1100
>1,100
양성시험관수
MPN/100(mL)
양성시험관수
MPN/100(mL)
10
1
0.1
10
1
0.1
0
0
0
0
0
1
0
0
2
0
0
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0
1
0
0
1
1
0
1
2
0
1
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0
2
0
0
2
1
0
2
2
0
2
3
0
3
0
0
3
1
0
3
2
0
3
3
1
0
0
1
0
1
1
0
2
1
0
3
1
1
0
1
1
1
1
1
2
1
1
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1
2
0
1
2
1
1
2
2
1
2
3
1
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0
1
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1
1
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2
1
3
3
<3
3
6
9
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6.1
9.2
12
6.2
9.3
12
16
9.4
13
16
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3.6
7.2
11
15
7.4
11
15
19
11
15
20
24
16
20
24
29
2
0
0
2
0
1
2
0
2
2
0
3
2
1
0
2
1
1
2
1
2
2
1
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2
2
0
2
2
1
2
2
2
2
2
3
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3
0
2
3
1
2
3
2
2
3
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0
0
3
0
1
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2
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1
0
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1
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1
2
3
1
3
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1
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2
3
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0
3
3
1
3
3
2
3
3
3
9.2
14
20
26
15
20
27
34
21
28
35
42
29
36
44
53
23
38
64
95
43
75
120
160
93
150
210
290
240
460
1100
>1,100
※ 최확수법을 이용한 판정 시 양성 시험관수가 모두 0인 경우 결과값은 0으로 간주한다.
출처: 식품의약품안전처 「식품의 기준 및 규격 (식품공전) 제8. 일반시험법 4. 미생물시험법」 4.8 (2026-10-21 확인). 원문의 배지 이름 옆에 대응하는 TM MEDIA 제품 코드를 붙였습니다. 시험 전에는 원문을 확인해 주세요.