4.11 살모넬라

가. 증균배양

1) 식품 및 식육：시료 25 mL(g)에 225 mL의 펩톤식염완충액(Buffered Peptone Water, 시액 7TM2017TM307)을 첨가하여 36±1℃에서 18～24시간 배양한 후 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(배지 82TM423)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV 배지(배지 54TMH111TM2302) 또는 RVS 배지(배지 83TM1282)에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃ (RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20～24시간 동안 증균배양한다. 시료를 가하지 아니한 동일 펩톤식염완충액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

2) 소, 돼지도체：제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균 가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 최종용량이 40 mL 되게 BPW를 넣은 다음 균질화 시킨 후 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가 아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 1차 배양액은 1) 식품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

3) 닭, 오리도체：제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 다)닭의 시료 채취방법에 따라 채취한 시료 30 mL을 취하여 30 mL BPW에 넣은 다음 균질화 시키고 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. 시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 1차 배양액은 1) 식품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

4) 식용란：식용란 20개를 채취하여 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.3. 식용란의 시험법 5.3.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 조제에 따라 소독 한 후 말린 식용란을 깨서 4L 용량의 멸균비커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비한 다음 (달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨다. 준비된 시료에 2L의 멸균 TSB를 섞어 35℃에서 24±2시간 동안 증균한다. 시료를 넣지 않은 멸균 TSB를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 1차 배양액은 1) 식품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

<제2026-40호, ’26.5.19>[시행일 : ’27.1.1.]

4) 식용란：40개를 채취하여 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.3. 식용란의 시험법 5.3.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 조제에 따라 소독하고 말린 후 20개씩 깨서 각각 약 4 L 용량의 멸균비커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비한 다음(달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화시킨다. 각각의 준비된 시료에 2 L의 멸균 TSB를 섞어 35±1℃에서 24±2시간 동안 증균한다. 각각의 배양액으로부터 1 mL 이상의 동량을 취하여 혼합한 후 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지 (배지 82TM423)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV 배지(배지 54TMH111TM2302) 또는 RVS 배지(배지 83TM1282)에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20～24시간 동안 증균배양한다. 시료를 넣지 않은 멸균 TSB를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

각각의 증균배양액을 XLD Agar(배지 55TMH112)와 동시에 BG Sulfa 한천배지(배지 84TM033), Bismuth Sulfite 한천배지(배지 61TM946TM039), Desoxycholate Citrate 한천배지(배지 31TM088TM369), HE 한천배지(배지 85TM121) 또는 XLT4 한천배지(배지 86TM493)에 도말한 후 36±1℃에서 20～24시간 배양한다. 의심집락은 5개 이상 취하여 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

1) 생화학적 확인시험

의심스러운 집락에 대해 TSI Agar(배지 32TM424) 또는 LIA 사면배지(배지 93TM171)에 천자하여 37±1℃ 에서 20～24시간 배양한다. TSI 및 LIA 검사결과 살모넬라균으로 추정되는 균에 대해서는 그람음성의 간균임을 확인하고, Indol(-), MR(+), VP(-), Citrate(+), Urease(-), Lysine(+), KCN(-), malonate(-) 시험등의 생화학적 검사를 실시하여 살모넬라 양성유무를 판정한다.

2) 응집시험

균종 확인이 필요한 경우 살모넬라진단용 항혈청을 사용한 응집반응 결과에 따라 균종을 결정한다. 먼저 살모넬라 O혼합혈청 시험으로서 다가 O항혈청을 사용하여 슬라이드 응집 반응검사를 실시한 후 살모넬라 O인자 혈청시험 즉 A, B, C, D, E군 등의 인자 항혈청으로 슬라이드 응집반응을 실시하여 O혈청형을 결정한다. H인자 혈청시험은 편모(H)항혈청 즉 a, b, c, d, e, h, g, k, l , r, y, 1.2, 1.3, 1.5, 1.6 등에 대해 시험관 응집반응을 실시하여 결정한다.