4.28 비브리오 콜레라

가. 증균배양

신선 수산물 검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 Alkaline 펩톤수(배지 16TM352TM008)를 가한 후 35∼37℃에서 6∼8시간 증균배양한다. 그 외 냉동 등 가공처리된 검체의 경우 18∼24시간 증균배양한다.

나. 분리배양

증균배양액을 TCBS 한천배지(배지 17TM1299)와 mCPC 한천배지(배지 101TM1422(신설))에 각각 접종하여 35∼37℃에서 18∼24시간 배양한다. 배양 결과 비브리오 콜레라는 TCBS 한천배지에서 노란 색의 sucrose 분해 집락, mCPC 한천배지에서 녹색∼자주색 집락에 대하여 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 LIM 반유동배지(배지 18TM2174TM225), 2% NaCl을 첨가한 보통한천 배지(배지 8TM341)에 각각 접종한 후 35~37℃에서 18∼24시간 배양한다. 비브리오 콜레라는 그람 음성의 무아포간균으로 LIM배지에서 Lysine Decarboxylase 양성, Indole 생성, 운동성 양성, Oxidase시험 양성이다. 비브리오 콜레라로 추정된 균은 0, 6 및 10% NaCl을 포함한 Alkaline 펩톤수(배지 16TM352TM008)에 의한 내염성시험, Arginine 분해시험(배지 21TM085, 1% Arginine첨가), ONPG (배지22TM1918)시험을 실시한다. 비브리오 콜레라는 0% NaCl 배지에서 발육 양성, 6% 및 10% NaCl을 포함한 배지에서는 발육 음성, Arginine 분해 음성, ONPG 시험 양성이다. 필요한 경우 비브리오 콜레라 진단용 항혈청을 사용한 응집반응 결과에 따라 O1, O139 혈청형을 확인한다.