4.13 장염비브리오

4.13.1 정성시험

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 Alkaline 펩톤수(배지 16TM352TM008)를 가한 후 35～37℃에서 18～24시간 증균배양한다. 검체를 가하지 아니한 동일 Alkaline 펩톤수를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균배양액을 TCBS 한천배지(배지 17TM1299)에 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. 배양 결과 직경 2～4 mm인 청록색의 서당(sucrose) 비분해 집락에 대하여 확인시험을 실시한다.

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 LIM 반유동배지(배지 18TM2174TM225), 2% NaCl을 첨가한 보통한천배지 (배지 8TM341) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40TMH103)에 각각 접종한 후 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. 배양 후 그람염색을 실시하여 그람음성 간균을 확인한다. 장염비브리오는 LIM배지 에서 Lysine Decarboxylase 양성, Indole 생성, 운동성 양성이다. 장염비브리오로 추정된 균은 Oxidase시험, 0, 6, 및 10% NaCl을 포함한 Alkaline 펩톤수(배지 16TM352TM008)에 의한 내염성시험, Arginine 분해시험(배지 21TM085, 1% Arginine 첨가), ONPG(배지 22TM1918)시험을 실시한다. 장염비브리오는 0% 및 10% NaCl 포함한 배지에서 발육 음성, 6% NaCl을 포함한 배지에서는 발육 양성, Arginine 분해 음성, ONPG 시험 음성이다

4.13.2 정량시험

가. 균수측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 하여 10배 단계 희석액을 만든 다음 각 단계별 희석액을 TCBS 한천배지(배지 17TM1299) 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL가 되게 도말한다. 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35～37℃ 에서 18～24시간 배양한 다음 청록색의 서당(sucrose) 비분해 집락을 계수한다.

나. 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 2% NaCl을 첨가한 보통한천배지 (배지 8TM341) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40TMH103)에 접종하고 35～37℃에서 18～24시간 배양한 후 4.13.1 정성시험 다. 확인시험에 따라 시험을 실시한다.

다. 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다. 예를들어 10-1 희석용액을 0.3 mL, 0.3 mL, 0.4 mL씩 3장의 선택배지에 도말 배양하고, 3장의 집락을 합한 결과 50개의 전형적인 집락이 계수되었고 5개의 집락을 확인한 결과 4개의 집락이 장염비브리오로 동정되었을 경우 시험 용액 1mL에 장염비브리오의 수는 50 × (4/5) × 10 = 400으로 계산한다.