4.19 캠필로박터 제주니/콜리

가. 증균배양

1) 식품 및 식육：검체 25 g(mL)를 Campylobacter supplement (A)(유가공품의 경우는 Campylobacter supplement(B))가 첨가된 HUNT(CEB) 배지(배지 47), Bolton 배지(배지 65TM1510) 또는 Preston 배지(배지 72TM603) 100 mL에 넣고 균질화한 후 35∼37℃에서 4～5시간 동안 미호기적(5% O2, 10% CO2, 85% N2)으로 1차 증균하고 42±1℃에서

44 ± 4시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, HUNT 배지를 사용할 경우, 2차 증균시 일반식품은 Cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 유제품은 Rifampicin용액(0.125 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하여 배양한다. 모든 시험에서는 시험용액을 가하지 아니한 동일 증균배지를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

2) 소, 돼지도체：제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 25 mL BPW를 넣은 다음 균질화를 시킨 후 혈액을 첨가하지 않는 2XBolton 배지(2XBF-BEB) 25 mL를 넣고 미호기적 조건 으로 42±1℃에서 48±2시간 배양한다. 시료를 채취하지 않은 동일 멸균가아제나 스폰지로 대조시험액을 제조하고 함께 시험하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

3) 닭, 오리도체：제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 다)닭의 시료채취방법에 따라 채취한 시료 30 mL에 혈액을 첨가하지 않는 2XBolton 배지(2XBF-BEB) 30 mL를 넣고 균질화 한 후 미호기적 조건에서 42±1℃ 48±2시간 배양한다. 시료 채취 시 사용한 동일 BPW 또는 BPD를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.

나. 분리배양

증균배양액을 modified Campy blood free 한천배지(배지 48TM1146) Abeyta-Hunt Blood 한천배지 (배지 49), Preston 한천배지(배지 69TM1590), CCA 한천배지(배지 70TM1158) 또는 BCA 한천배지(배지 71)에 접종하여 42±1℃에서 24～48시간 미호기적으로 암소에서 배양한다.

다. 확인시험

Modified Campy blood free 한천배지상에서 원형 또는 불규칙한 형태로서 반투명한 흰색 또는 투명한 집락, Abeyta-Hunt Blood 한천배지(배지 49)상에서 무지개빛 광택 집락, Preston 한천배지(배지 69TM1590)에서는 부드러운 모서리를 가진 불규칙한 원모양을 형성하는 반투명의 흰색집락 (일부 균주는 황갈색 또는 약한 핑크색 집락을 형성), CCA(배지 70TM1158) 및 BCA 한천배지(배지 71) 에서는 불규칙한 가장자리를 가지고 점액이 있으며 회색인 평평한 집락(24～48시간 배양 후 용혈은 나타나지 않으며 분홍색이나 노란-회색집락이 나타나기도 한다)을 선별하여 혈액한천 배지(배지 73TM360)에 신속히 접종하고 42±1℃에서 24～48시간 미호기적으로 배양한다. 배양된 집락을 취하여, 암시야 또는 위상차현미경으로 검경하거나 또는 대비 염색하여 지그재그 모양을 관찰 한다. 이때 대비염색은 10 mL 식염수에 2방울의 crystal violet을 혼합한 용액을 이용한다. 현미경상으로 확인된 균에 대하여 catalase, oxidase 및 indoxyl acetate hydrolysis 양성임을 확인한다. 확인된 균에 대하여, 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성, 25℃에서 비생육 등을 확인 하며, 캠필로박터 콜리는 hippurate 분해 음성, 25℃에서 비생육 여부 등 생화학시험을 실시 한다.