ES 05705.1 대장균 · 시험관법

(Escherichia coli-Multiple Tube Fermentation Method)

1.0 개요

1.1 목적

이 시험기준은 수돗물, 먹는물공동시설 등에 존재하는 대장균을 분석할 때 검사결과의 정확성과 통일성을 제공하는 데 필요한 제반사항을 규정함을 목적으로 한다.

1.2 적용범위

이 시험기준은 「먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙」 제2조의 규정에 따른 수돗물, 먹는물공동시설 등의 수질검사에 적용한다.

1.3 “내용 없음”

2.0 용어정의

2.1 대장균

총대장균군에 속하면서 베타-글루쿠론산 분해효소(β-glucuronidase)의 활성을 가진 세균을 말한다.

3.0 분석기기 및 기구

3.1 피펫 또는 자동피펫

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부피 1 mL ～ 25 mL인 눈금피펫이나 자동피펫(플라스틱피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2 마개 달린 유리시험관

중시험관(안지름 18 mm, 높이 180 mm)으로 플라스틱이나 금속 등과 같은 재질의 마 개를 적용할 수 있고, 고압증기멸균을 할 수 있어야 한다. 또한 자외선 아래에서 형광을 띠지 않아야 한다.

3.3 다람(Durham)시험관

중시험관용 다람시험관(안지름 6 mm, 높이 30 mm)을 사용한다.

3.4 접종루프(Inoculation loop)

루프의 안지름이 약 3 mm인 접종루프를 사용한다.

3.5 항온수조 또는 배양기

온도를 (44.5 ± 0.2) ℃로 유지할 수 있는 항온수조를 사용하거나 동등한 사양의 배양기를 사용한다.

3.6 자외선 램프

365 nm ～ 366 nm(6와트) 범위의 파장 조사가 가능해야 한다.

4.0 시약 및 표준용액

4.1 시약

상용화된 완성제품을 사용할 수 있으며, 제조하여 사용할 때는 정제수 1 L에 표 1의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후 pH가 (6.9 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 다람시험관 이 들어 있는 시험관에 10 mL씩 나누어 넣고 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균한 다.

4.2 “내용 없음”

5.0 시료채취 및 관리

5.1 멸균된 시료용기를 사용하여 무균적으로 시료를 채취하고 즉시 시험해야 한다. 즉시 시험할 수 없으면 빛이 차단된 1 ℃ ～ 5 ℃ 냉장 보관 상태에서 30시간 이내에 시험해야 한다.

5.2 잔류염소가 존재하는 경우, 잔류염소 제거를 위한 시약은 잔류염소 4 mg/L 이하인 시료 1 L 기준으로 멸균한 티오황산나트륨 용액 (80 g/L) 1 mL에 준하는 양을 첨가하 며, 잔류염소의 농도에 따라 첨가량을 조절한다.

5.3 수도꼭지에서 시료를 채취할 때는 수도꼭지를 틀어 수돗물을 2분 ～ 3분간 흘려버 린 후 채취한다. 수도꼭지에 연결된 부착물은 제거하고 깨끗한 헝겊이나 휴지로 이물질 을 닦아낸 후 시료를 채취한다. 필요하면 가스버너 등으로 수도꼭지 입구를 충분히 소독 성 분

조 성 트립톤(tryptone)

20.0 g 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30)

5.0 g 바일솔트 3번(bile salts No.3)

1.5 g 인산일수소칼륨(dipotassium phosphate, K2HPO4, 분자량 : 174.18)

4.0 g 인산이수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 분자량 : 136.09)

1.5 g 염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 분자량 : 58.50)

5.0 g MUG(4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide)

0.05 g 표 1. 시험관법 확정시험용 배지(EC-MUG 배지TM1027) 조성

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한다.

6.0 정도보증/정도관리(QA/QC)

6.1 이 시험기준을 처음 실시하거나 사용하던 배지, 시약 등의 제조사가 바뀔 때마다 양 성대조군과 음성대조군 시험을 동시에 실시해야 한다. 양성대조군 시험결과는 양성, 음성대조군 시험결과가 음성으로 나왔을 때만 유효한 결과값으로 판정한다.

6.2

양성대조군은 Escherichia coli 표준균주를 사용하고, 음성대조군은 멸균 희석액을 사용한다.

7.0 분석절차

7.1 “내용 없음”

7.2 시험방법

7.2.1 추정시험

총대장균군 시험관법 추정시험과 동일하다.

7.2.2 확정시험

총대장균군 추정시험이 양성일 때 수행한다.

7.2.2.1 총대장균군 추정시험에서 기체가 발생했거나 세균이 증식된 시험관 또는 산을 생성한 모든 시험관에 대하여 지름 3 mm의 접종루프를 사용해 무균 조작으로 확정시험용 배지(EC-MUG 배지TM1027)가 든 시험관에 이식하고 (44.5 ± 0.2) ℃의 항온수조에서 (24 ± 2) 시간 배양한다.

7.2.2.2 배양 후 암실에서 자외선램프(365 nm ～ 366 ㎚, 6 와트)를 사용하여 MUG에 의한 형광을 관찰할 수 없으면 대장균 음성으로 판정하고 형광이 나타나면 대장균 양성 2024

7.2.3

모든 시험은 음성대조군 시험을 동시에 실시하며 음성대조군 시험결과는 음성으로 나왔을 때만 유효한 결과값으로 판정한다.

8.0 결과보고

8.1 결과 표기

대장균이 검출되지 않으면 ‘불검출/100 mL’로, 검출되면 ‘검출/100 mL’로 표기한다.

9.0 참고자료

9.1

Standard Method 9221, 23rd edition, Multiple-tube fermentation technique for members of the coliform group(2017).

10.0

“내용 없음”