ES 05708.1 아황산환원혐기성포자형성균 · 시험관법

(Clostridium perfringens-Multiple Tube Method)

1.0

개요

1.1

목적

이 시험기준은 샘물·먹는샘물, 염지하수·먹는염지하수, 먹는해양심층수 등에 존재하는 아 황산환원혐기성포자형성균을 분석할 때 검사결과의 정확성과 통일성을 제공하는 데 필 요한 제반사항을 규정함을 목적으로 한다.

1.2

적용범위

이 시험기준은 「먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙」 제2조의 규정에 따른 샘물· 먹는샘물, 염지하수·먹는염지하수, 먹는해양심층수 등의 수질검사에 적용한다.

1.3 “내용 없음”

2.0

용어정의

2.1

아황산환원혐기성포자형성균

운동성이 없는 그람 양성균으로 아황산을 환원하여 유황기체를 발생하며 포자 생성능을 가진 기회성 병원균을 말한다.

3.0

분석기기 및 기구

3.1

피펫 또는 자동피펫

부피 1 mL ～ 10 mL인 메스피펫이나 자동피펫(플라스틱피펫팁 포함)으로서 멸균된 것을 사용한다.

3.2

나선식 마개 달린 시험관

약 50 mL 부피의 고압증기멸균이 가능하고 투명한 붕규산 재질의 나선식 마개가 있는 시험관을 사용한다.

3.3

항온수조

수온을 (75.0 ± 1.0) ℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

3.4

배양기

배양온도를 (37.0 ± 1.0) ℃로 유지할 수 있는 것을 사용한다.

4.0

시약 및 표준용액

4.1

시약

4.1.1

아황산환원력 시험 배지(2배 농후 DRCMTM625 배지, 2×differential reinforced clostridial media)

상용화된 완성제품을 사용할 수 있으며, 제조하여 사용할 때는 정제수 1 L에 표 1의 조성대로 넣고 완전히 녹인 후 25 ℃에서 pH가 (7.1 ± 0.2)가 되도록 조정한 다음 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

조 성 트립톤(tryptone)

10.0 g 펩톤(peptone)

10.0 g 소고기 추출물(beef extract)

16.0 g 효모 추출물(yeast extract)

2.0 g 시스테인 염산염(L-cystein HCl, C3H7NO2S HCl, 분자량 : 175.64)

1.0 g 가용성 전분(soluble starch, (C6H10O5)n)

2.0 g 포도당(dextrose, C6H12O6, 분자량 : 180.16)

2.0 g 아세트산나트륨(sodium acetate, CH3COONa, 분자량 : 82.04)

10.0 g 아황산수소나트륨(sodium bisulfite, NaHSO3, 분자량 : 104)

1.0 g 시트르산암모늄철(ferric ammonium citrate, C6H8O7.Fe.NH3, 분자량 : 264.85)

1.0 g 레사주린(resazurin sodium)

0.004 g 표

1.

아황산환원력시험

배지(2배

농후

DRCMTM625

배지,

2×differential

reinforced clostridial media) 조성

4.1.2

액체 파라핀(liquid paraffin)

4.2

“내용 없음”

5.0

시료채취 및 관리

5.1

멸균된 시료용기를 사용하여 무균적으로 시료를 채취하고 즉시 시험해야 한다. 즉시 시험할 수 없으면 빛이 차단된 1 ℃ ～ 5 ℃ 냉장 보관 상태에서 30시간 이내에 시험해야 한다.

5.2

잔류염소가 존재하는 경우, 잔류염소 제거를 위한 시약은 잔류염소 4 mg/L 이하인 시료 1 L 기준으로 멸균한 티오황산나트륨 용액 (80 g/L) 1 mL에 준하는 양을 첨가하 며, 잔류염소의 농도에 따라 첨가량을 조절한다.

5.3

수도꼭지에서 시료를 채취할 때는 수도꼭지를 틀어 수돗물을 2분 ～ 3분간 흘려버 린 후 채취한다. 수도꼭지에 연결된 부착물은 제거하고 깨끗한 헝겊이나 휴지로 이물질 ES 05708.1e 2024 - 4 -

을 닦아낸 후 시료를 채취한다. 필요하면 가스버너 등으로 수도꼭지 입구를 충분히 소독 한다.

5.4

먹는샘물, 먹는해양심층수, 먹는염지하수 제품수는 병의 마개를 열지 않은 상태의 제품을 말하며, 병의 마개가 열린 것은 시료로 사용할 수 없다.

6.0

“내용 없음”

7.0

분석절차

7.1

“내용 없음”

7.2

시험방법

7.2.1

아포형성 시험

시료 10 mL씩을 나선식 마개가 5개 있는 시험관에 무균 상태로 넣은 후 수온을 (75.0 ± 1.0) ℃로 유지한 항온수조에 15분간 정치한다. 이때 아포를 형성하지 못하는 균은 모두 사멸하고 아포를 형성할 수 있는 세균만 생존하게 된다.

7.2.2

아황산환원력 시험

7.2.2.1

7.2.1의 시험관을 즉시 20 ℃ 전후로 냉각한 다음 아황산환원력 시험 배지(2 배 농후 DRCMTM625 배지)를 각각 10 mL씩 넣고 기포가 생기지 않도록 시료와 배지를 혼 합한 후 미리 멸균한 액체파라핀을 2 mL ～ 3 mL씩 무균 상태로 배지 표면에 넣고 마개를 단단히 닫는다. 그리고 (37.0 ± 1.0) ℃로 (44 ± 4)시간 배양한다.

[주 1] 혐기성 조건을 만들기 위해 혐기성 배양조(anaerobic jar)에 시험관과 혐기성 가스촉진제 팩(gas pack), 혐기조건 지시제를 함께 넣은 후 배양할 수 있다.

7.2.2.2

배양한 후 시험관 5개 중 1개라도 검게 변하면 아황산이 환원된 것으로 보고 아황산환원혐기성포자형성균 양성으로 판정한다.

7.2.3

모든 시험은 음성대조군 시험을 동시에 실시하여 음성대조군 시험결과는 음성으로 2024

8.0

결과보고

8.1

결과의 표기

아황산환원혐기성포자형성균이 검출되지 않으면 ‘불검출/50 mL’로, 검출되면 ‘검출/50 mL’로 표기한다.

9.0

“내용 없음”

10.0

“내용 없음”