TM2168
L.J. MEDIUM MODIFIED
혼합 균총에서 Mycobacterium species의 분리용
개요
결핵균의 분리 및 배양에 사용되는 고체 배지는 계란 기반 배지 또는 한천 기반 배지로 나뉩니다. 계란 기반 배지는 전란 또는 난황, 감자 가루, 소금, 글리세롤을 함유하고 있으며, 농축 과정을 통해 고체화됩니다. 계란 기반 배지 중에서는 로웬스타인-젠슨 배지(Lowenstein-Jensen Medium, L.J. Medium)가 가장 일반적으로 사용됩니다. L.J.
조성Composition
| 성분 | g / L |
|---|---|
| L-Asparagine | 3.600 |
| Potassium dihydrogen phosphate | 2.400 |
| Magnesium sulphate | 0.240 |
| Sodium citrate | 0.600 |
| Potato flour | 30.000 |
| Malachite green | 0.400 |
| 합계 | 37.240 |
조제 방법
- glycerol 12 mL를 함유한 정제수 또는 증류수 600 mL에 37.24 g을 녹인다(소 유래 세균 또는 glycerol을 기피하는 기타 균에는 glycerol을 첨가하지 않는 것이 좋다).
- 필요하면 가열하여 배지를 완전히 녹인다.
- 15 psi(121°C)에서 15분간 고압증기멸균한다.
- 그 사이에 무균적으로 채취한 전란 유화액 1000 mL를 준비한다.
- egg emulsion base와 LCN Supplement를 무균적으로 첨가하고 균일한 혼합물이 되도록 부드럽게 섞는다.
- 멸균 나사식 뚜껑 시험관에 분주한다.
- 튜브를 비스듬히 눕혀 놓는다.
- inspissator 수조 또는 고압증기멸균기에서 85°C로 45분간 배지를 응고 및 건조(inspissation)시킨다.
품질 관리Quality control
- 분말 외관
- 청록색~공작 청색의 균질한 상태
- 조제 후 외관
- 멸균 기본 배지와 전란 유화액의 혼합물을 건열 응고시키면 옅은 청록색의 불투명하고 매끄러운 사면이 형성됨
- pH (25°C)
- 7.0±0.2
품질 확인 균주 (배양 결과)
| 균주 | ATCC | 접종량 (CFU/mL) | 성장 | Growth with Gruft Supplement | Colony Characteristic | 배양 온도 | 배양 시간 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Mycobacterium avium | 25291 | 50-100 | 왕성 | 양호~왕성 | 매끄럽고 색소가 없는 집락 | 35-37°C | 2~4주 |
| Mycobacterium gordonae | 14470 | 50-100 | 왕성 | 양호~왕성 | 매끄러운 노란색, 주황색 집락 | 35-37°C | 2~4주 |
| Mycobacterium kansasii | 12478 | 50-100 | 왕성 | 양호~왕성 | 광발색성, 매끄러움~거침 | 35-37°C | 2~4주 |
| Mycobacterium smegmatis | 14468 | 50-100 | 왕성 | 양호~왕성 | 주름지고 크림빛 흰색 집락 | 35-37°C | 2~4주 |
| M. tuberculosis H37RV | 25618 | 50-100 | 왕성 | 양호~왕성 | 과립상, 거칠고 사마귀 모양의 건조하고 부서지기 쉬운 집락 | 35-37°C | 2~4주 |
보관
건조 분말은 흡습성이 있으므로 25~30°C의 건조한 곳에 용기를 단단히 밀봉하여 보관하고 직사광선을 피한다. 적정 조건에서 유효기간은 4년이다. 용기를 처음 열 때 라벨의 기재란에 개봉 일시를 적고, 필요한 양을 덜어낸 뒤에는 흡습을 막기 위해 뚜껑을 꼭 닫는다.
자료Documents
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